Mehanizmi stimulacije fosfolipaze C endotelinima u proksimalnim kanalićima štakorskog bubrega : doktorska disertacija - Knotek, Mladen (Zagreb : M. Knotek, 1996)
Sažetak: Mehanizmi stimulacije fosfolipaze C (PLC) endotelinima istraživani su u proksimalnim kanalićima (PT) štakorskog bubrega. Endotelin (ET)-1, ET-2, ET-3 i sarafotiksin S6c (S6c) stimulirali su PLC u svježe izoliranim stanicama PT, ET-1, ET-2 i S6c izazvali su porast koncentracije 1,2-diacilglicerola (DAG), inozitol 1,4,5-trifosfata (InsP3) i fosfokolina (Pcho) u stanicama PT što ukazuje na stimulaciju PLC specifične za fosfatidilinozitol (PtdIns) i fosfatidilkolin (PtdCho). ET-3 je potaknuo stvaranje samo DAG-a i PCho što govori u prilog stimulacije PtdCho-specifične PLC. Nakon izlaganja bubrežnih ploški ET-1, ET-2 i ET-3 kao i S6c koncentracija DAG-a porasla je u četkastim membranama (BBM).
Toksini pertusisa i kolere nisu utjecali na signal pobuđen ET-3 i S6c, upućujući na uključenost pripadnika Gq razreda G bjelančevina u stimulaciju PLC endotelinskim receptorima u BBM. Tirfostin, AG-115, je bio također neučinkovit, ukazujući da nije došlo do stimulacije PLC [gama]. Inhibitor ETA,B receptora bozentan inhibirao je učinak ET-3 u BBM. ET-1, ET-2 i ET-3 izazvali su premještanje protein kinaze C u četkastu membranu. U bazolateralnoj membrani (BLM) nije opažena promjena u koncentraciji DAG-a nakon izlaganja ploški ET-1 i ET-2, odnosno S6c. Također nije došlo do premještanja protein kinaze C nakon izlaganja ploški ET-1 i ET-2 u BLM. Nasuprot tomu ET-3 je stimulirao oslobađanje DAG-a, kao i premještanje PKC u BLM.
Bozentan, kao i antagonist ETA receptora BQ123 nisu utjecali na učinak ET-3 u BLM. Bez učinka bili su i toksini pertusisa i kolere, kao i AG-115, što ukazuje na spregu PLC s Gq bjelančevinama. Ovi rezultati ukazuju na prisutnost endotelinskih B receptora u BBM, a C receptora u BLM stanica proksimalnih kanalića. ETB su stimulirali PtdIns2-specifičnu, kao i PtdCho-specifičnu PLC, dok su ETC stimulirali samo PtdCho-specifičnu PLC.
Summary: Mechanisms of phospholipase C(PLC) stimulation by endothelins (ET) were investigated in proximal tubules (PT) of rat kidney. Et-1, ET-2, ET-3 and sarafotoxin S6c (S6c) stimulated PLC in freshly isolated PT cells. ET-1, ET-2 and S6c increased the concentration of 1,2-diacylglicerol (DAG), inositol 1,4,5-triphosphate (InsP ) as well as phosphocholine (Pcho) in PT cells reflecting the stimulation of both phosfatydilinositol (PtdIns)- and phosphatydilcholin (PtdCho)-specific PLC. ET-3 caused the increment in DAG and PCho levels, representing the stimulation of the PtdCho-specific PLC. ET-2, ET-3 and S6c increased DAG content in brush-border membranes (BBM). ET-3 action in the BBM was inhibited by the ET receptor antagonist bosentan.
Pertussis and cholera toxin had no influence on the signall generated by ET-3 and S6c,suggesting involvement of Gq class of G proteins in PLC stimulation by ET receptors.Tyrphostin,AG-115,was also ineffestive making the stimulation of PLC[gama] unlikely. ET-2 and ET-3 translocated protein kinase C (PKC) to the BBM. In basolateral membranes (BLM) there was no change in DAG concentration upon incubation of cortical slices with ET-1, ET-2 and S6c and PKC did not translocate in response to ET-1 and ET-2 in BLM. On the contrary ET-3 increased DAG concentration and translocated PKC to the BLM. Bosentan, as well as an ETreceptor antagonist BQ123 did not affect ET-3 action in BLM.
Pertussis and cholera toxin as well as AG-115 had no effect either, suggesting coupling of BLM PLC to Gq proteins. These results are consistent with the presence of the endothelin B receptor in BBM, and C receptor in BLM of the PT cells. The ET is coupled to the PtdIns2 - and PtdCho-dependent PLC, while the ET may be coupled only to the PtdCho-dependent PLC.
mentor: Hrvoje Banfić; Komisija za ocjenu: Ita Samaržija, Marko Mesarić, Hrvoje Banfić; Komisija za obranu: Ita Samaržija, Marko Mesarić, Hrvoje Banfić; datum obrane: 04.07.1996
Sveučilište u Zagrebu, Medicinski fakultet, Zagreb, 1996
Bibliografija: str. 91-107
Summary
Keywords: Esteraze -- Enzimska aktivnost -- Bubrežne stanice